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人非小细胞肺癌细胞A549与金年会金字招牌诚信至上品牌结合的研究

发布时间:2025-07-20   信息来源:洪冠爱

培养条件包括气相和温度的保持。气相为95%空气与5%二氧化碳,培养温度为37℃。在培养基中添加10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素/链霉素(P/S)以提供必要的营养。该细胞系来源于一位58岁白人男性的肺癌组织,具有合成高含量不饱和脂肪酸卵磷脂的能力。

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金年会金字招牌诚信至上,建议在传代时遵循以下步骤:当细胞未达到80%汇合度时,将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中,保留5ml,再放置于37℃的培养箱中培养。若细胞密度超过80%,则可进行传代。

贴壁细胞的传代步骤如下:

  1. 弃去培养液,用不含钙和镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞变性情况。当细胞大部分变圆并脱落时,迅速加5ml完全培养基终止消化。
  3. 轻轻吹打细胞,使之完全脱落后吸出,将悬液转移至15ml离心管中。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清,添加1-2ml完全培养基重悬。
  4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代,补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞的传代步骤也不容忽视:

  1. 进行半换液法,将培养瓶竖立静置1小时,轻柔吸掉约3ml培养基后,再补充3ml完全培养基。
  2. 如需分瓶,收集细胞悬液至离心管,1000RPM离心5分钟,弃去上清,补加1-2ml培养液后重悬,并按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml新完全培养基。

关于细胞冻存,推荐如下步骤:

  1. 细胞生长至80%覆盖时,弃去培养液,用PBS洗涤细胞一次。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml,观察细胞行为,终止消化后将悬液转移至15ml离心管,1000RPM离心5分钟。
  3. 将沉淀细胞与无血清冻存液混合后加入冻存管中,然后直接放置于-80℃冰箱中。
  4. 在需要转入液氮罐时,需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮。

细胞复苏时,从液氮取出冻存管,需迅速置入37℃水浴中解冻,解冻后用75%酒精消毒管外壁,再将细胞移至含5ml完全培养基的离心管中,进行离心;接着用完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,在37℃、5%CO2条件下培养,第二天更换新鲜完全培养基。注意,部分细胞在运输中可能会脱落,但如处理得当,可以实现成功复苏和培养。

金年会金字招牌诚信至上,奉行严格的操作规范,以确保细胞培养过程顺利,保障实验结果的可靠性和准确性。